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技术文章

固相萃取的操作流程
阅读次数:42   发布时间:2021/10/21 16:30:45
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1、预处理
预处理又称为活化,即使用适宜的溶剂通过色谱柱,再用水或缓冲液冲洗、替代滞留在柱中的溶剂,活化过程中应使固定相始终浸于溶液中。活化的目的在于去除填料中可能存在的杂质,并使填料溶剂化,以提高萃取的重现性,若未充分活化,可能导致溶质过早穿透而影响回收率。
2、上样
预处理过后,即可添加试样通过固相萃取柱,在此过程中,目标分析物被吸附在固定相中。分析物是否被充分吸附是影响试验回收率的关键。因此,为防止分析物的流失,试样溶液中溶剂的强度不可太大,同时可采取以下几个方法尽量减少分析物的流失:①用强度较弱的溶剂稀释溶液;②减少加样体积;③增加固定相填料的量;④选择Z适宜的固定相。
上样体积主要取决于固相萃取柱固定相填料的量和类型、试样中各组分物质的浓度和性等因素,可通过实验获得穿透体积来确定。穿透体积是指在固相提取时化合物随样品溶液的加入而不被自行洗脱下来所能流过的Z大液样体积,Z终的加样体积要小于穿透体积,以防止在柱洗涤过程中目标分析物流失。
3、柱洗涤
柱洗涤则是在上样后采用强度适宜的溶剂将干扰物淋洗下来,同时使目标分析物能保留在固定相上,通过不断调整洗涤剂的种类、比例和体积,可获得Zui佳洗涤溶剂配比,以达到Zui佳洗涤效果。
4、目标物的洗脱与收集
目标物洗脱与收集是通过加入对目标分子亲和力更强的溶剂,将其洗脱下来,同时将与固定相作用力更强的干扰物保留在柱上,收集洗脱液。
洗脱溶剂的强度影响洗脱效果,当使用溶剂的强度较强时,较少量的溶剂即可洗脱,但当样品成分较为复杂时,与固定相作用力强于目标物的杂质也可能被洗脱下拉,造成干扰。
当使用强度稍弱的溶剂时,为了充分洗脱,所用的溶剂量较大,收集到的溶液需再经氮吹浓缩。因此,应根据实际情况调整溶剂强度与用量,以得到Zui佳的富集纯化效果。

原创作者:北京欧冠赛程万博|首页登陆

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